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發(fā)布時(shí)間:2022-08-04 01:08:41
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熒光原位雜交儀中抗體純化—Protein A/G親和純化:Protein A是一種分離自金黃色釀膿葡萄球菌的細(xì)胞壁蛋白,通過Fc區(qū)與哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。Protein A可用于分離和純化IgG及其亞類與片段。Protein A 瓊脂糖柱適合于免疫沉淀鼠IgG2a, IgG2b, IgA, human IgG1, IgG2IgG4。Protein G是一種分離自G 型鏈球菌的細(xì)胞壁蛋白,通過Fc區(qū)與哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。與Protein A Agrose相比對(duì)IgG具有更好的結(jié)合能力。Protein G Agarose適合于免疫沉淀鼠 IgG1,IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, 兔子和羊多克隆抗體, 以及人 IgG1, IgG2, IgG3和IgG4。

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蛋白同位素標(biāo)記是經(jīng)典的一種蛋白示蹤和蛋白組學(xué)定量技術(shù),與體外標(biāo)記技術(shù)相比,同位素標(biāo)記技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記。原理:用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素 (重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸,細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸全部摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合,經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。

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熒光原位雜交儀的探針有DNA探針和RNA探針,可對(duì)動(dòng)物組織和植物組織中核酸進(jìn)行檢測(cè),特異性較高。雜交所用的探針大致可以分為三類:(1)染色體特異重復(fù)序列探針;(2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針;(3)原位雜交儀特異性位置探針,由一個(gè)或幾個(gè)克隆序列組成。探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物系標(biāo)記的dUTP經(jīng)過缺口平移法進(jìn)行標(biāo)記;而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸蔌磷酸戊糖骨架共價(jià)結(jié)合,或在缺口平移法標(biāo)記探針時(shí)將熒光素核苷三磷酸摻入。

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全自動(dòng)原位雜交儀中的噬菌體展示技術(shù)為全人源治療性抗體的研發(fā)提供了基礎(chǔ),拓展了定向進(jìn)化技術(shù)在抗體多肽改造篩選方面的應(yīng)用,對(duì)抗體藥物的研制具有重要意義。熒光原位雜交儀噬菌體展示系統(tǒng):M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫(kù)展示系統(tǒng),通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá),使之參與噬菌體組裝,并展示在噬菌體表面,形成噬菌體展示文庫(kù)。