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發(fā)布時(shí)間:2022-07-17 01:08:51
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大腸桿菌(E.coli)重組蛋白表達(dá)技術(shù)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展,全自動(dòng)原位雜交儀已經(jīng)變得日趨成熟。但想要在大腸桿菌表達(dá)體系獲得較高水平的可溶性以及高產(chǎn)量的蛋白表達(dá),尤其是針對(duì)大分子蛋白和某些藥物類(lèi)蛋白,一個(gè)優(yōu)質(zhì)的表達(dá)策略必不可少??蛻?hù)只需要提供我們一段蛋白序列,CDS或蛋白名稱(chēng),我們富有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家均可以為您在較短的時(shí)間內(nèi)制定一個(gè)完整的蛋白表達(dá)和純化方案。常見(jiàn)的小分子(分子量<10 kDa)蛋白類(lèi)藥物,如Leptin,利拉魯肽,EGF等在原核表達(dá)過(guò)程中以親和標(biāo)簽+融合蛋白形式進(jìn)行表達(dá),發(fā)酵和純化。

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掃描文庫(kù)是指通過(guò)定點(diǎn)誘變,將客戶(hù)指定區(qū)域內(nèi)的某些殘基依次替換為一個(gè)指定的殘基。丙氨酸和半胱氨酸掃描是兩個(gè)常用的掃描庫(kù)。隨機(jī)突變文庫(kù)將允許您在用戶(hù)定義的小區(qū)域(即200bp-1500bp 內(nèi)的ORF 區(qū)域)中創(chuàng)建隨機(jī)氨基酸替換。然后可以表達(dá)這些蛋白質(zhì)并分析其功能以確定蛋白質(zhì)工程研究中的有益替代。通過(guò)將不同的遺傳元件進(jìn)行多種組合,科學(xué)家可以創(chuàng)建一個(gè)突變體庫(kù),幫助他們找到有利的組合。Gene Universal 提供傳統(tǒng)的部分隨機(jī) (NNK/NNS) 和完全隨機(jī) (NNN) 突變文庫(kù)服務(wù)。

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佰泉生物提供基因定點(diǎn)突變服務(wù),我們的技術(shù)專(zhuān)家可以將突變或改變的基因序列嵌入目標(biāo)基因序列中。定點(diǎn)突變通過(guò)創(chuàng)建特定的 DNA 突變(包括點(diǎn)突變、缺失突變和插入突變)來(lái)促進(jìn)生命科學(xué)研究,從而能夠研究基因調(diào)控元件、DNA-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)/功能、酶活性位點(diǎn)和新蛋白質(zhì)。佰泉生物全自動(dòng)原位雜交儀原位雜交儀提供的基因定點(diǎn)突變服務(wù)可以提供準(zhǔn)確的突變DNA克隆,為客戶(hù)縮短項(xiàng)目周期,節(jié)省成本。

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蛋白酵母表達(dá)系統(tǒng)兼具部分原核蛋白表達(dá)特征(培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快、表達(dá)水平高、操作簡(jiǎn)便)和部分真核蛋白表達(dá)特征(蛋白翻譯后能進(jìn)行正確加工、修飾,合理的空間折疊)。重組蛋白酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:重組蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系統(tǒng)中表達(dá),且能高水平表達(dá),達(dá)到5g/L;外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色體上,隨染色體復(fù)制而不會(huì)丟失;酵母具有真核生物的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),具有糖基化、脂肪?;?、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能,適合活性蛋白表達(dá);容易實(shí)現(xiàn)超高密度發(fā)酵,卡梅德生物能同時(shí)為客戶(hù)提供多種規(guī)格的蛋白酵母發(fā)酵規(guī)模。

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首先,成功率!原位雜交儀可以大大提高您實(shí)驗(yàn)的成功率。全程由機(jī)器程序控制的變性、復(fù)性過(guò)程避免了手工操作過(guò)程中的不確定性,同時(shí)也避免了甲酰胺、水浴鍋等因素造成的影響。一次FISH實(shí)驗(yàn)僅探針便價(jià)值逾千元,如果因?yàn)椴僮魇д`而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果作廢,損失相當(dāng)慘重。若干次實(shí)驗(yàn)失誤的損失便足以購(gòu)買(mǎi)一臺(tái)雜交儀了。其次,效率!原位雜交儀可大大增進(jìn)您工作的效率,一臺(tái)ThermoBrite雜交儀可同時(shí)進(jìn)行12個(gè)樣本的雜交工作,試想,如果您要同時(shí)手工操作12個(gè)樣本的變性、梯度脫水,干燥、加探針、預(yù)熱雜交盒、雜交的過(guò)程,是一件多么繁瑣且耗時(shí)的工作!

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熒光原位雜交儀的探針有DNA探針和RNA探針,可對(duì)動(dòng)物組織和植物組織中核酸進(jìn)行檢測(cè),特異性較高。雜交所用的探針大致可以分為三類(lèi):(1)染色體特異重復(fù)序列探針;(2)全染色體或染色體區(qū)域特異性探針;(3)原位雜交儀特異性位置探針,由一個(gè)或幾個(gè)克隆序列組成。探針的熒光素標(biāo)記可以采用直接和間接標(biāo)記的方法。間接標(biāo)記是采用生物系標(biāo)記的dUTP經(jīng)過(guò)缺口平移法進(jìn)行標(biāo)記;而直接標(biāo)記法是將熒光素直接與探針核苷酸蔌磷酸戊糖骨架共價(jià)結(jié)合,或在缺口平移法標(biāo)記探針時(shí)將熒光素核苷三磷酸摻入。